本標準規(guī)定了公共場所集中空調通風系統(tǒng)6類微生物指標的檢測方法，適用于各類公共場所集中空調通風系統(tǒng)，其他場所可參照執(zhí)行。以下按檢測對象分類整理核心內容：

一、冷卻水與冷凝水中嗜肺軍團菌（第3章）

1. 檢測目的

定性測定冷卻水、冷凝水及其沉積物中嗜肺軍團菌，評估軍團菌病感染風險。

2. 核心原理

樣品經培養(yǎng)在GVPC瓊脂平板生成典型菌落，在BCYE瓊脂生長而在BCYE-CYE（缺L-半胱氨酸）不生長，結合生化與血清學鑒定確認嗜肺軍團菌。

3. 關鍵儀器與培養(yǎng)基

4. 采樣規(guī)范

• 采樣瓶：滅菌500mL廣口瓶，加0.3-0.5mL硫代硫酸鈉中和氧化物

• 采樣點：冷卻水距塔壁20cm、液面下10cm；冷凝水在排水管或冷凝水盤

• 采樣量：每點無菌取水樣約500mL

• 保存：2天內送達實驗室，避光避熱，室溫≤15天，無需冷凍

5. 檢驗流程

1. 樣品預處理：沉淀或1000r/min離心1min去雜質

2. 過濾：濾膜過濾后置于15mL滅菌水充分洗脫

3. 處理方式：洗脫液+熱處理(50℃水浴30min)+酸處理(pH2.2,5min)各0.1mL接種GVPC平板

4. 培養(yǎng)：35-37℃、2.5%CO?培養(yǎng)10天，第3天起每日觀察

5. 驗證：可疑菌落接種BCYE/BCYE-CYE，前者生長后者不生長為軍團菌

6. 鑒定：生化（氧化酶-/+、硝酸鹽還原-、尿素酶-、明膠液化+、水解馬尿酸）+血清學分型

6. 結果判定

陽性：檢出符合上述特征的嗜肺軍團菌；陰性：未檢出

二、送風中細菌總數（第6章）

1. 檢測目的

定量測定送風空氣中細菌污染水平，評估空氣質量。

2. 核心原理

撞擊法采樣，營養(yǎng)瓊脂35-37℃培養(yǎng)48h，計數嗜中溫性需氧/兼性厭氧菌落總數（CFU/m3）。

3. 采樣與培養(yǎng)

• 采樣：撞擊式采樣器，采樣量≥50L，采樣點在送風口下方15-20cm、水平50-100cm

• 培養(yǎng)：營養(yǎng)瓊脂35-37℃，48h，計數30-300CFU平板

• 結果計算：細菌總數(CFU/m3)=平均菌落數×1000/采樣體積(L)

三、送風中真菌總數（第7章）

1. 檢測目的

定量測定送風真菌污染，評估過敏與霉變風險。

2. 核心原理

撞擊法采樣，沙氏瓊脂（含氯霉素）28℃培養(yǎng)5天，計數真菌菌落總數（CFU/m3）。

3. 關鍵參數

• 培養(yǎng)基：沙氏瓊脂+氯霉素（抑制細菌生長）

• 培養(yǎng)：28℃，5天

• 限值參考（WS394-2012）：普通場所≤500CFU/m3；檔案室≤300CFU/m3

四、送風中β-溶血性鏈球菌（第8章）

1. 檢測目的

定性/定量測定送風空氣中β-溶血性鏈球菌，評估呼吸道感染風險。

2. 核心原理

撞擊法采樣于血瓊脂，35-37℃培養(yǎng)24-48h，觀察β溶血環(huán)，結合鏡檢與生化鑒定。

3. 關鍵要點

• 培養(yǎng)基：血瓊脂平板（羊血/兔血）

• 鑒定：革蘭氏陽性鏈狀球菌，β溶血，桿菌肽敏感，CAMP試驗等

• 結果：報告有無檢出，必要時定量（CFU/m3）

五、送風中嗜肺軍團菌（第9章）

1. 檢測目的

定性測定送風空氣中嗜肺軍團菌，評估空氣傳播感染風險。

2. 核心原理

液體沖擊法采集氣溶膠，經酸處理后培養(yǎng)，同冷卻水檢測流程鑒定。

3. 采樣與培養(yǎng)

• 采樣設備：微生物氣溶膠濃縮器（流量≥100L/min）+液體沖擊采樣器（7-15L/min）

• 吸收液：GVPC液體培養(yǎng)基+酵母提取液雙份采樣

• 采樣量：每點采集1-2m3空氣

• 保存：4h內送實驗室，避光避熱

• 培養(yǎng)：同冷卻水檢測，35-37℃、5%CO?培養(yǎng)10天

4. 結果判定

系統(tǒng)陽性：任一采樣點檢出嗜肺軍團菌；系統(tǒng)陰性：全部采樣點未檢出

六、風管內表面細菌總數與真菌總數（第11章）

1. 檢測目的

定量測定風管內表面微生物污染，評估系統(tǒng)清潔度。

2. 核心原理

定量采樣機器人或25cm2規(guī)格板擦拭采樣，分別用營養(yǎng)瓊脂（35-37℃,48h）和沙氏瓊脂（28℃,5天）計數，結果以CFU/cm2表示。

3. 采樣與處理

• 采樣工具：無菌棉簽/擦拭布，用Tween-80水溶液濕潤

• 采樣面積：25-100cm2，無菌操作擦拭表面

• 處理：擦拭物放入Tween-80水溶液，10倍梯度稀釋，取適宜稀釋度接種

• 培養(yǎng)：同送風中細菌/真菌總數培養(yǎng)條件

七、質量控制要點

1. 所有采樣器具需滅菌，操作全程無菌

2. 空白對照：每批樣品設采樣介質空白、試劑空白、培養(yǎng)空白

3. 陽性對照：定期用標準菌株驗證檢測系統(tǒng)有效性

4. 人員資質：檢測人員需經專業(yè)培訓，持證上崗

5. 結果報告：注明檢測依據、采樣點、培養(yǎng)條件、菌落數及換算結果

八、標準關系與限值參考

• 本標準為檢測方法標準，結果判定需結合WS 394-2012《公共場所集中空調通風系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》限值要求

• 主要限值參考：

• 冷卻水/冷凝水：嗜肺軍團菌不得檢出

• 送風：細菌總數≤500CFU/m3；真菌總數≤500CFU/m3；β-溶血性鏈球菌不得檢出

• 風管內表面：細菌總數≤100CFU/cm2；真菌總數≤100CFU/cm2